Tinción

TINCIÓN
-

*Coloración. Es el proceso de teñir artificialmente un compuesto para facilitar su estudio en el microscopio.
-
*Colorante. Compuesto organico que contiene anillos bencenicos, cromoforos y auxocromos.
Los cromóforos son grupos que le dan un color específico a un compuesto ligado a un grupo auxocromo este le da la propiedad de formar sales y transferir el color del tinte a una sustancia o material sobre la cual actúa.
Colorantes básicos tienen grupo auxocromos NH2 o N( CH3) 2 y ácidos con grupos auxocromos COOH, OH y SO3H2.

*Métodos de coloración
• coloraciones selectivas. Para capsulas, granulas metacromáticos, citoplasma, esporas, flagelos y el núcleo en los protozoarios patógenos.
• coloraciones diferenciales como el método de Gram.
• coloraciones directas como el azul de metileno de Loffler o los colorantes de anilina que le dan color al organismo estudiado.
• coloraciones indirectas como la nigrosina o tinta china que tiñen el fondo y no al microorganismo el cual se ve por contraste.
Uso de los colorantes en el laboratorio. Para teñir bacterias y hacerlas visibles al microscopio, para mostrar la estructura del organismo estudiado, para identificación de microorganismos, para inhibir el desarrollo de algunas bacterias y poder estudiar otros microorganismos que si se desarrollan. El cristal violeta a determinada concentración, inhibe el desarrollo de los cocos gran positivos y lo mismo el violeta de genciana. El verde brillante se añade a los medios de cultivos para inhibir el desarrollo de Escherichia Coli que se encuentra en abundancia en heces, y de esta manera se ayuda al aislamiento de Salmonella thyposa, que suele estar en número menor y no es inhibida por el verde brillante.

*Coloración de gram
• colorante inicial colorante de Gram. violeta de genciana, violeta de metilo, cristal violeta, azul victoria. en agua destilada.
• solución yodo-yodurada de Gram lugol. Se prepara con 1 g de yodo en 2 g de yoduro potásico en 300 ml de agua destilada. Esta solución debe ser alcalina, por tanto la presencia de acido hace que las bacterias gran positivas aparezcan como gran negativas.
• decolorante. alcohol al 95%, acetona o una mezcla a partes iguales de alcohol y acetona...
• colorante de contraste. safranina o fucsina fenicada.
-
Técnica:

.Recoger la(s) muestra(s)en un porta objetos
.Realizar el extendido en espiral
.Dejarlo secar a temperatura ambiente
.Fijar la muestra al calor (flameando 3 veces aproximadamente)
.Agregar azul violeta (cristal violeta o violeta de genciana) y esperar 1min aproximadamente. Esta tinción crara un tono morado azulado a las bacterias Gram positivas.
.Enjuagar con agua- de preferencia destilada-
Agragar lugol y esperar 30 segundos y enjuagar con agua
.Agragar alcohol acetona y esperar 30 segundos a la decoloración y luego enjuagar con agua
.Agregar safranina y esperar 1 minuto. Este dejará de color rosado las bacterias Gram negativas.
.Enjuagar con agua para luego observar al microscopio óptico -es conveniente hacerlo a 100x con aceite de inmersión.

Continuara...